请教:氨基酸序列的测定方法
有两种方法,一是直接测序列法,常用Edman降解法,在弱碱性条件下多肽连N端氨基酸(阿尔发)与PITC反应,标记为苯氨基硫代甲酰蛋白质。肽链中的第一个肽键变弱,在无水酸的存在下发发生降解,第一个氨基酸(AA1)经过分子重排成为PTH-AA1结合层析技术即可确定氨基酸的性质。C端氨基酸残基分析,可用;羧基肽酶,肼解法;二是串联质谱测定多肽链氨基酸测序。
氨基酸(amino acid):含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称。生物功能大分子蛋白质的基本组成单位,是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。是含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物。氨基连在α-碳上的为α-氨基酸。组成蛋白质的氨基酸均为α-氨基酸。
氨基酸序列测定有何意义?
蛋白质序列分析一直是蛋白质化学中一项具有战略意义的工作。通常使用专一化学试剂或具有不同水解专一性蛋白酶,得到有可能重叠的序列的肽段,从而推断出蛋白的氨基酸序列。蛋白质的一级结构是其高级结构的基础,因此,蛋白质序列分析对于获得有关高级结构的信息是一个很有用的基础。 蛋白测序提供的信息可以确定组成蛋白质的氨基酸的种类,确定蛋白质N-末端的氨基酸序列,确定新的蛋白质,通过DNA重组技术构建寡核苷酸探针;根据免疫学机理制备抗多肽的抗体。
氨基酸的测序的方法和原理
氨基酸测序分为N端测序和C端测序,原理是用氨肽酶(N端测序法)或羧肽酶(C端测序法)将肽链从一端依次切下,并在一段时间内检测切下的氨基酸的种类(时间过长则会出现多种氨基酸),并且重复该过程。
必需氨基酸有9种:甲硫氨酸、缬氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、色氨酸、苏氨酸(可以用“甲借来一本两色书”来帮助记忆,虽然“缬氨酸”的“缬”正确读音是“鞋”而不是“杰”)。
氨基酸测序
说明您的这个蛋白是有两个不同的亚基组成的,可以把SDS-PAGE上的蛋白转印到PVDF膜上直接拿去测序。
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