线粒体螯合铁探针（线粒体靶向技术）

本文目录一览：

• 1、Mito Tracker Red CMXRos的标记原理是什么？
• 2、关于细胞染色 比如 线粒体、高尔基体、细胞核、细胞质什么的，它们染色的染色剂是什么？原理又是什么？
• 3、如何检测线粒体内的ROS
• 4、线粒体探针 普通荧光显微镜 能看到吗
• 5、线粒体的活性离开细胞的线粒体有活性吗，可以完成什么
• 6、线粒体膜电位分析试剂盒(JC-1)有什么特点？

Mito Tracker Red CMXRos的标记原理是什么？

原理：用于对活细胞线粒体进行染色，该染料的积累取决于膜电位。

定义：MitoTracker Red CMXRos 是一种红色荧光染料，用于对活细胞线粒体进行染色，并且该染料的积累取决于膜电位。乙醛固定后，该染料可稳定保存。

荧光染料常用于荧光染料产品的制备，以及增白洗衣粉中的增白剂，指示信号用的各种荧光路标漆，荧光标志服等。

荧光染料的其他用途包括: 渗漏污水系统包括水和工业的污染物、连接系统、测量发电厂排出的液体、洗手间的渗漏、非法的连接污水管监察，研究流量和绘图，分析腐败的系统，此外还用于纤维织物印染和某些特种标志（如暗处符号）及军事追踪等。

扩展资料：

荧光标记的单克隆抗体技术为流式细胞仪在研究细胞膜和细胞内各种功能性抗原、肿瘤基因蛋白等领域扩展了无限的应用空间。

荧光探针可以通过蛋白质交联剂共价结合在单克隆抗体上。免疫荧光标记最常用的染料有异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)、藻红蛋白（PE）以及AlexaFluor系列染料等。

核酸荧光染料对细胞核染色后定量测量细胞所发出的荧光强度，就可以确定细胞核中DNA、RNA的含量，并可以对细胞周期和细胞的增殖状况进行分析。

有多种荧光染料可以对细胞中的DNA或RNA染色，常用的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst 33342等，RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。

参考资料来源：百度百科-荧光染料

关于细胞染色 比如 线粒体、高尔基体、细胞核、细胞质什么的，它们染色的染色剂是什么？原理又是什么？

1. 线粒体、高尔基体、细胞核、细胞质这些都是细胞内的物质，这些物质都被细胞膜和细胞壁保护着的，染料是不能进入，所以被染色的细胞都是死亡了的。

2.细胞核都含有遗传物质，染色可以用苏木精。这是至今为止最优良的细胞核染色剂，优点是几乎所有植物的任何组织中的细胞核都能被它强烈染色。苏木精本身不是染料，起作用的是他的氧化产物苏木精素，依靠硫酸铁按或硫酸铝按等媒染剂来染色。常用配方是1铁矾-苏木精，2醋酸-铁矾-苏木精。

3.细胞质染色：细胞质内包含了细胞液、线粒体、高尔基体等染色原理和试剂是一样的。最常用的碱性品红，顾名思义，它呈现碱性，而染色质也呈现碱性，所以在配置品红染液时在其中加入醋酸或盐酸，它们一方面与品红牢固结合，一方面与染色质结合，达到染色目的，且染色效果好，细胞质一般被染成淡紫红色，或无色，而细胞核被染成深紫红色或紫色，对比十分强烈。有两个重要的配方，一个是石碳酸-品红，一个是锡夫试剂，网上很容易查到具体配方。

常用的还有其他的试剂

1、斐林试剂配制：1）甲液质量浓度为 0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml2）乙液质量浓度为0.05g/ml，取5gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml临用时将甲、乙液等量混合作用：鉴定还原性糖：C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。还原性糖与斐林试剂发生作用，生成砖红色沉淀。如用于鉴定组织液中有否还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。2、班氏尿糖定性试剂配制：称取17.4克无水硫酸铜（CuSO4）溶解于100毫升热蒸馏水中，冷却后，稀释到150毫升。称取柠檬酸钠173克及无水碳酸钠（Na2CO3）100克，加蒸馏水600毫升，加热使之溶解，冷却后，稀释到850毫升。把硫酸铜溶液倾入柠檬酸钠及碳酸钠溶液中，搅匀后即为班氏尿糖定性试剂。用细口瓶贮存备用（为了防止氢氧化铜沉淀的生成，故加入柠檬酸钠。柠檬酸钠是一种亲水性掩蔽性络合物形成剂，它能与铜离子形成可溶性络盐）。使用方法同斐林试剂，所不同的是班氏试剂可长期使用。3、双缩脲试剂配制：A液：质量浓度为 0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100mlB液：质量浓度为0.01g/ml，取1gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml使用时，先加A液，后加B液作用：鉴定蛋白质，蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可产生紫色反应。也可用于鉴定多肽。4、苏丹Ⅲ配制：取0.1g苏丹Ⅲ，溶解在20ml95%酒精中作用：鉴定脂肪，脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染成红色）。5、质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液的混合液（1：1）。作用：用于洋葱根尖的解离，即使组织中的细胞相互分离开来。能杀死细胞固定。6、质量浓度为0.01g/mL的或0.02g/mL龙胆紫溶液（或醋酸洋红溶液）配制：是将龙胆紫溶解在质量分阶段数为2%的醋酸溶液中配制而成作用：使细胞核内的染色体着色，便于观察。7、质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液作用：观察成熟植物细胞质分离时用。经此处理细胞仍具活性。8、质量浓度为0.1mg/ml的亚甲基蓝溶液配制：将亚甲基蓝溶于蒸馏水中配制而成作用：（1）用于观察根对矿质元素离子的交换吸附观察；（2）用于检测水中细菌情况，根据亚甲基蓝褪色情况，判断水质被细菌污染情况。是活体染色剂。9、丙酮是有机溶剂，在叶绿体中色素提取时，用于溶解叶绿体中的色素。可用酒精替代，不过提取色素时将绿叶放入酒精中隔水加热10、层析液配制：由20份石油醚（在60~900C下分馏出来的）、2份丙酮和1份苯混合而成。是一种脂溶性很强的有机溶剂，叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同：溶解度高的随层析液在滤纸上扩散很快；溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。代用品：93号汽油、四氯化碳11、SiO2、CaCO3加入少许SiO2是为了研磨得充分；加入少许CaCO3是为了防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。12、碘液配制：取2gKI ，溶解在5ml蒸馏水中，再加1gI，待溶解后用蒸馏水稀释至300ml。溶液在光亮处容易变成紫色，必须保存在暗色玻璃瓶里。作用：用来测定淀粉，淀粉遇碘后，形成紫色的复合物。13、二苯胺配制：称取1.5g二苯胺，溶于100mL冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸，用棕色瓶保存。临用前，在10mL的上述溶液中再加入0.1mL体积分数为0.2%的乙醛溶液。作用：DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色。14、NaOH：用于吸收CO2（验证光合作用需要CO2）或改变溶液的pH,15、Ca(OH)2：鉴定CO2（验证呼吸作用产生CO2）。16、NaHCO3：提供CO2等。 我再补充一个：台盼蓝（Trypan Blue，也称Direct blue 14）：一种死细胞染色用色素化学名：3,3′-{[3,3′-Dimethyl(1,1′-biphenyl)-4,4′-diyl]bis(azo)}bis(5-amino-4-hydroxy-2,7-naphthalenedisulfonic acid), tetrasodium salt3,3’-{[3,3’-二甲基-(1,1’-二苯基)-4,4’-二基]双(偶氮)}-双(5-氨基-4-羟基-2,7-萘二磺酸)，四钠盐分子式：C34H24N6Na4O14S4分子量：960.81CAS Number： 72-57-1外观：黑褐色结晶粉末摩尔吸光度：69,000(在606nm附近)染色原理：细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。严格来说，台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性， 通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经死亡。这被称为染料排除测试（dye exclusion），Erythrosin B(红色)、negrosine、eosin Y、AO和EB也用于此目的。通过显微镜很容易就能识别出死亡的被台盼蓝染色的细胞，并可使用细胞计数器进行计数。溶于水，可以配制成10mg/ml的水溶液，水溶液呈深蓝色。台盼蓝主要用来鉴定原代培养细胞时,细胞分离后的存活情况，用0.4%台盼蓝直接染色5-10分钟，在显微镜下观察即可。应用于细胞凋亡：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。尽管在凋亡的早期到中期检测是很困难的，此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。储存条件：常温保存注意事项：1. 台盼蓝对人体有毒2. 台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。

如何检测线粒体内的ROS

活性氧检测试剂盒是利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。活性氧检测试剂盒。

荧光法检测线粒体产生和释放的反应性氧化物（ROS）[10]。羟基自由基的检测（二羟苄胺DHBAs和水杨酸盐Salicylate）[11] ROS was evaluated by the staining of 2’，7’- dichlorofluorescein diacetate（二氯荧光乙酰乙酸盐）.ROS production was detected by nitroblue tetrazolium （NBT，硝基四氮唑蓝）assay。

目前，对于细胞线粒体产生的ROS 测定，所发展的方法有（荧光标记后）激光扫描共聚焦显微术（Takahashi et al.，2002）和荧光探剂DCFDA标记后的荧光分光光度法（Esposti ，2002）等，本实验以lucigenin 或luminol 为探剂，用化学发光技术，对从正常大鼠肝细胞及心肌细胞分离的线粒体的METC 电子漏进行了测定

线粒体探针 普通荧光显微镜 能看到吗

1 线粒体可以被光镜看到，但需被染色。

2 线粒体的精细结构无法看到，需要电子显微镜才能看到。

线粒体的活性离开细胞的线粒体有活性吗，可以完成什么

线粒体的活性离开细胞的线粒体有活性

活性氧检测试剂盒是利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。活性氧检测试剂盒。

研究了三丁基锡(TBT)对大鼠肝脏ROS、抗氧化酶和解毒系统酶的影响.SD大鼠随机分为6组,TBT染毒剂量各组分别为,0,0.1,0.3,1.0,3.0,10.0mg/kg(B?W),连续灌胃7d,第8d处死,取肝脏检测活性氧(ROS)水平、谷胱甘肽转硫酶(GST)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、谷胱甘肽还原酶(GR)活性和谷胱甘肽(GSH)含量.结果表明,ROS随TBT浓度增加而升高,各浓度组均有显著性差异.在0.3,1.0mg/kg时,GST活性升高且具有显著性差异,在3.0,10.0mg/kg有下降趋势;GR活性也升高且具有显著性差异.CAT活性及GSH含量在各浓度组均无明显变化.研究结果提示,染毒各组ROS水平明显升高,而与ROS去除有直接关系的GSH水平和CAT活性没有发生相关的变化,因此TBT在代谢转化过程中产生的自由基不能及时被清除可能是导致ROS水平明显升高的重要原因.

线粒体膜电位分析试剂盒(JC-1)有什么特点？

线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10)是一种以JC-10为荧光探针,快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位变化的试剂盒,可以用于早期的细胞凋亡检测。

JC-10是一种广泛用于检测线粒体膜电位Ψm△的理想荧光探针。可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。在线粒体膜电位较高时,JC-10聚集在线粒体的基质中,形成聚合物,可以产生红色荧光;在线粒体膜电位较低时,JC-10不能聚集在线粒体的基质中,此时JC-10为单体,可以产生绿色荧光。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位

的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。

线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。通过JC-10从

红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降,同时也

可以用JC-10从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测

指标。