层析法分离氨基酸图片（层析法分离氨基酸图片解释）

本文目录一览：

• 1、为什么可以用纸层析法分离谷氨酸和赖氨酸？
• 2、如何用纸层析法对氨基酸进行定性和定量的测定
• 3、氨基酸的分离鉴定–纸层析法 有什么注意事项
• 4、纸层析法分析氨基酸结果

为什么可以用纸层析法分离谷氨酸和赖氨酸？

谷氨酸为酸性（极性）氨基酸，丙氨酸为非极性氨基酸。于是在以极性有机溶剂（酒精）为展层剂的的流动相中，非极性的迁移快，而谷氨酸在乙醇的分配系数比丙氨酸大，迁移率慢。

纸层析法依据极性相似相溶原理，是以滤纸纤维的结合水为固定相，而以有机溶剂作为流动相。由于样品中各物质分配系数不同，因而扩散速度不同，从而达到分离的目的。

试样经层析后可用比移值（Rf）表示各组成成分的位置（比移值＝原点中心至色谱斑点中心的距离与原点中心至流动相前沿的距离之比），由于影响比移值的因素较多，因此一般采用在相同实验条件下对照物质对比以确定其异同。

扩展资料：

叶绿体中色素的分离一般采用纸色谱法，主要包括胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a和叶绿素b，它们在色谱溶液中的溶解度不同。含量越高的色素带也越宽。最后在滤纸上留下4条色素条，采用纸色谱法。

颜料分离原理：纸色谱是一种以滤纸为载体的色谱分析方法。其原理主要是利用混合物中的成分。流动相和固定相的分布比（溶解度）使它们分离。滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维通常能吸附约20％的水），乙醇等有机溶剂为流动相，色素提取液为色谱样品。

参考资料来源：百度百科——纸层析法

如何用纸层析法对氨基酸进行定性和定量的测定

1、在滤纸条上端边缘约1厘米的中央剪一小孔。

2、将滤纸条平放于洁净的纸上，在距离滤纸下端25px处用铅笔轻画一横线，并在横线的中央画一直径为2mm的小圆圈。

3、用毛细管吸取氨基酸混合液，在滤纸条下端的小圆圈内点样。

4、取干燥大试管，加入被水饱和的酚溶液10ml，注意勿使溶液沾到试管壁上，将试管垂直固定在距滤纸条下端12.5px处穿大头针。从滤纸条上端小孔处穿棉线并左右分开，调节线的高度使滤纸垂直悬于试管内且下湍浸入溶液12.5px，注意勿使点样点浸入溶液中，亦勿使滤纸条接触试管壁。

5、此时即可看到溶剂向上移动，溶剂升到一定高度时，小心将纸条取出，以铅笔标出溶剂上升的前沿。

6、将滤纸条两端，用大头针钉在小木框上，吹干后用喷雾器均匀地喷一层0.2%茚三酮乙醇溶液，然后再将滤纸条吹干，即可看到纸上显出三色点，每个色点代表一种氨基酸。

在层析时，将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。

纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动。

扩展资料：

在滤纸纤维上吸附着一层水保持成为固定相，另一部分是能溶于水的有机溶剂，如苯酚或正丁醇作为流动相，它沿着滤纸长的方向向上或向下流动。

氨基酸的亲脂性愈强，则与有机溶剂一起移动的倾向愈大; 氨基酸的亲水性愈强，则被保留在固定相中的趋势愈大。

以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。

当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离（Rf值）与已知样比较，进行定性。

用斑点扫描仪或将组分点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量（如光度法、比色法等）。

参考资料来源：百度百科-氨基酸纸层析法

百度百科-纸层析法

氨基酸的分离鉴定–纸层析法 有什么注意事项

点样时要避免手指或唾液等污染滤纸有效面（即展层时样品可能达到的部分）。

氨基酸的一个重要光学性质是对光有吸收作用。20种Pr——AA在可见光区域均无光吸收，在远紫外区（220nm）均有光吸收。

在紫外区（近紫外区）（220nm～300nm）只有三种AA有光吸收能力，这三种氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸，因为它们的R基含有苯环共轭双键系统。

扩展资料：

物理性质：

氨基酸为无色晶体，熔点超过200℃，比一般有机化合物的熔点高很多。α-氨基酸有酸、甜、苦、鲜4种不同味感。谷氨酸单钠盐和甘氨酸是用量最大的鲜味调味料。氨基酸一般易溶于水、酸溶液和碱溶液中，不溶或微溶于乙醇或乙醚等有机溶剂。

氨基酸在水中的溶解度差别很大，例如酪氨酸的溶解度最小，25℃时，100g水中酪氨酸仅溶解0.045g，但在热水中酪氨酸的溶解度较大。赖氨酸和精氨酸常以盐酸盐的形式存在，因为它们极易溶于水，因潮解而难以制得结晶。

参考资料来源：百度百科-氨基酸

纸层析法分析氨基酸结果

氨基酸的分离鉴定——纸层析法

一,实验目的

掌握氨基酸纸层析的方法和原理,学会分析待

测样品的氨基酸成分.

二,实验原理

纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析.滤纸纤维上的羟基具有亲水性,吸附一层水作为固定相,有机溶剂为流动相.当有机相流经固定相时,物质在两相间不断分配而得到分离.

溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示:

Rf=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离

在一定的条件下某种物质的Rf值是常数.Rf值的大小与物质的结构,性质,溶剂系统,层析滤纸的质量和层析温度等因素有关.本实验利用纸层析法分离氨基酸.

三,实验器材

(1)大烧杯(5000mL):1只/组

(2)微量注射器(100

L):1只/

组.

(3)喷雾器:公用.

(4)培养皿:1只/组.

(5)层析滤纸(长22cm,宽14cm的新华一号滤纸):1张/组.

(6)直尺,铅笔:自备.

(7)电吹风:1只/组.

(8)托盘,针,白线:1套/组.

(9)手套:1双/组.

(10)塑料薄膜:公用.

(11)小烧杯:50mL,1只/组.

四,实验试剂

(1)扩展剂:将4体积正丁醇和1体积冰醋酸放入分液漏斗中,与5体积水混合,充分振荡,静置后分层,弃去下层水层.

(2)氨基酸溶液:0.5%的已知氨基酸溶液3种(赖氨酸,苯丙氨酸,缬氨酸),0.5%的待测氨基酸液1种.

(3)显色剂:0.1%水合茚三酮正丁醇溶液.

实验试剂

五,实验操作

检查培养皿是否干燥,洁净;若否,将其洗净并置于干燥箱内120℃烘干.

(1)平衡:剪一大块塑料薄膜铺在桌面上,将层析缸或大烧杯到置于塑料薄膜上,再把盛有约20mL展层溶液的小烧杯置于倒置的层析缸或大烧杯中,用塑料薄膜密封起来,平衡20min.

(2)规划:带上手套,取宽约14cm,高约22cm的层析滤纸一张.在纸的下端距边缘2cm处轻轻用铅笔划一条平行于底边的直线A,在直线上做4个记号,记号之间间隔2cm,这就是原点的位置.另在距左边缘1cm处画一条平行于左边缘的直线B,在B线上以A,B两线的交点为原点标明刻度(以厘米为单位),参见左图.

(3)点样:用微量注射器分别取10mL左右的氨基酸样品(每取一个样之前都要用蒸馏水洗涤微量注射器,以免交叉污染),点在这四个位置上.挤一滴点一次,同一位置上需点2～3次,2～3mL/次,每点完一点,立刻用电吹风热风吹干后再点,以保证每点在纸上扩散的直径最大不超过3mm.每人须点4个样,其中3个是已知样,1个是待测样品.

(4)层析:用针,线将滤纸缝成筒状,纸的两侧

边缘不能接触且要保持平行,参见图3-3.向培养皿中加入扩展剂,使其液面高度达到1cm左右,将点好样的滤纸筒直立于培养皿中(点样的一端在下,扩展剂的液面在A线下约1cm),罩上大烧杯,仍用塑料薄膜密封.当扩展剂上升到A线时开始计时,每隔一定时间测定一下扩展剂上升的高度,填入表3-1中.当上升到15～18cm,取出滤纸,剪断连线,立即用铅笔描出溶剂前沿线,迅速用电吹风热风吹干.

(5)显色:用喷雾器在通风厨中向滤纸上均匀喷上0.1%茚三酮正丁醇溶液,然后立即用热风吹干,即可显出各层析斑点,参见左图.

(6)计算各种氨基酸的Rf值,并判断混合样品中都有哪些氨基酸,各人将自己的实验结果贴在实验报告上,见表3-2.

(7)以层析时间为横坐标,扩展剂上升高度为纵坐标画图,求出扩展剂上升到18cm时所需要的时间.

(8)将微量注射器内外用蒸馏水清洗干净,倒掉用过的展层液和平衡液,将培养皿洗净,整理好桌面上的仪器和试剂.