杂交h的简单介绍

请问谁知道h杂交野兔是真实还是骗局呢？

家兔染色体44个最好实地考察，二者根本无法受孕，附近居民走访打听！百度搜不到你身边的好坏！ 我觉得根本不存在什么杂交野兔。野兔染色体48个，纯粹是骗人的。都是比利时兔子

什么叫经济杂交？

利用品种间杂交，产生杂种优势，提高生产的一种交配制度。杂种优势是指杂种在一定特定性状表现上高于杂交组合中纯种性状平均值的超越部分。一般说来，杂种表现有生活力强、繁殖力高和生长快的特点，这是因为纯种，特别是高产优良品种在品种形式、定型阶段都采用过不同程度的近交，在品种之内固定了一些不合意基因，当两个品种杂交时，形成了新的杂合基因型，掩盖了纯种原有不合意基因的表现，杂合子的性状表现超过了纯种的平均值，即杂种优势现象。从遗传学上解释，杂种优势的出现主要来自群体内杂合率增加，产生显性和上位效应，从而使群体平均值增加。在国外，澳大利亚应用边区来斯特与澳洲美利奴杂交，在美国应用萨福克与兰布列斯杂交，生产羔羊肉，就是利用亲代群基因频率差异大，能取得明显杂种优势的一个实例。

用杂种一代的平均数与亲本平均数的差值表示杂种优势量（H）。杂种优势量除以亲本平均数，变换为用百分率表示的相对值，称杂种优势率，计算公式：

例：在羔羊肉生产杂交中，萨福克羊日增重372克，汉普夏羊日增重354克，两品种的杂种羔羊日增重386克。杂种优势率相当于

［386-1/2（372+354）］÷［1/2（372+354）］=0.0633或6.33%

环境、生产方式和品种对杂种优势表现有影响。低遗传力性状的杂种优势强于高遗传力性状（选择反应大的性状）。杂种优势在各性状上的单一效应能综合对总生产力产生累积性总效应。例如表8-6和表8-7按实配母羊为基数计算的羔羊断奶体重可以达到18%。

图6-6 山羊轮回性经济杂交

已知遗传力和杂种优势对不同性状存有相反的可逆现象，这样杂交和选择便可以结合用到经济羊场的选育计划中，通过杂交，利用杂种优势来改进繁殖力、成活率和总生产力，而通过选择来加快提高断奶后生长速度和产毛性状一类高遗传力性状。这是经济杂交在羊肉生产体系中广泛应用的一个方面。

原位杂交实验流程

1.探针的设计与合成

根据实验室已有的p8基因cDNA全长序列，用premier primer5.0设计引物p81和p82，以卤虫cDNA为模板，PCR扩增得到346bp的产物，回收纯化。

引物编号引物序列长度

p81TGCGGACGAAACAGGAAG18 bp

p82GCTCAAACAGTGATGCCAGT20 bp

目的片段克隆

1）在无菌离心管中加入连接载体的各种成分，载体与片段的摩尔比控制在1:3-1:8，根据凝胶电泳检测后的浓度及载体与片段分子大小来计算摩尔比。加入成分及比例如下：

目的PCR片段    5 μl

pGM-T载体（约50ng/uL）1 μl

10×T4 DNA Ligation Buffer  1 μl

T4 DNA Ligase（3U/uL）  1 μl

无菌去离子水3 μl

总体积  10 μl

2）轻轻弹动离心管以混合内容物，短暂离心。置于PCR仪中16℃过夜连接，反应结束后将离心管置于冰上。

3）向铺好的含有氨苄青霉素的固体平板表面加入16 μl的IPTG（50mg/ml）、40 μl的X-gal（20mg/ml），使用无菌的弯头玻璃棒将其均匀的涂开，避光置于37℃培养箱1-3小时，使溶解X-gal的二甲基甲酰挥发干净。

4）将10 μl的连接产物加到100 μl DH5a感受态细胞中，轻弹混匀，冰浴半小时，将离心管置于42℃水浴90秒，取出管后立即置于冰浴上放置2-3分钟，其间不要摇动离心管。向离心管加入500 μl 37℃预热的LB（不含抗生素）培养基，150rpm摇床37℃振荡培养45分钟。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。将菌液于4000g下离心10分钟，去掉上清，加入100 μl培养液重溶并加入到配制好的LB固体培养基上，用无菌的弯头玻璃棒轻轻将细胞均匀涂开。待平板表面干燥后，倒置平板，37℃培养12-16小时。

5）挑取白色菌落直接进行PCR检测，筛选转化子。

6）将转化子接种于LB液体培养基中培养24小时，吸取1mL菌液送至大连宝生物公司进行序列测序。

重组质粒的线性化

取6 μl以测序的重组质粒，选取NcoI内切酶37℃酶切4h。酶切反应体系为20 μl：

质粒    6 μl

10xK Buffer 2 μl

NcoI酶1 μl

0.1% BSA2 μl

灭菌水9 μl

终体积  20 μl

取酶切前后的质粒各4 μl，经1%琼脂糖电泳检测，确认酶切完全，将酶切产物用Takara胶回收试剂盒回收纯化，作为探针合成的模板。

探针合成

按试剂盒使用指南，标记反义RNA探针。

使用的所有试剂和器皿均经去RNase处理，合成方法如下：先准备反应体系。冰上向RNase-Free的微离心管中顺序加入下列试剂:

纯化的线形质粒1 μg

Rnase-free dH2Oup to 13 μl

10xNTP labeling mixture2 μl

10xTranscription buffer2 μl

Rnase inhibitor  1 μl

SP6 RNA Polymerase 2 μl

总体积  20 μl

稍混匀，短暂离心将反应液集于管底，37℃ 2 h。反应结束后再补加2 μl DNase I，37℃ 15 min，反应结束后加入0.2M EDTA 2 μl 终止反应。取3-5 μl 反应产物1%琼脂糖凝胶电泳检测。-20℃保存备用。

2.石蜡切片的制备

◆本实验在杂交结束前均必须保证RNase-free.玻璃器皿采用180℃烘烤10小时。其它采用DEPC处理，高温灭菌锅高温降解DEPC。若仪器不能高温处理，可用3%的H2O2处理半小时以上，DEPC水冲洗干净，烘干。

组织的固定与包埋

选取不同发育时期（0h，5h，10h，15h，20h，40h，3d，5d，7d）的卤虫，经DEPC处理水冲洗表面盐分后，加入新鲜配制的4%多聚甲醛，于4℃固定5-8

h，再分别按下列顺序进行脱水、透明和包埋: 30%乙醇脱水1 h，50%乙醇脱水1 h，70%乙醇脱水1 h，80%乙醇脱水乙醇脱水1

h，90%乙醇脱水1 h，无水乙醇脱水1 h，无水乙醇脱水1 h，无水乙醇:二甲苯(1:l)透明10 min，二甲苯透明10

min、二甲苯:54℃石蜡(1:1)浸蜡30 min，54℃石蜡浸蜡1 h，54℃石蜡包埋。

组织切片：将包埋的组织按7 μm的厚度切片，在多聚赖氨酸处理的载玻片上滴加DEPC处理水，组织片于42℃展片台上展片1小时，再置于40℃恒温箱中烘片12小时后放于4℃密封保存备用。

3.杂交前处理

切片经二甲苯脱蜡2×15 min，无水乙醇:二甲苯(1:l) 5 min，100%-95%-80%-50%-30%乙醇脱水各5 min，后DEPC处理水2×5 min，然后进行杂交前切片处理，具体步骤如下:

lxPBS(pH7.4)室温孵育2×5 min。

3%TtitonX-100的PBS中去膜处理15 min。

lxPBS洗涤2×5 min。

无RNase的蛋白酶K(20 mg/mL)37℃消化30 min。

100mMGly/PBS中洗2×5 min。

lxPBS洗涤2×5 min。

4%多聚甲醛(4℃)固定5min。

lxPBS洗涤2×5 min。

含有25%(W/v)的乙酸酐的100mM的三乙醇胺缓冲液(pH8.0)去电荷处理15 min(现配现用)。

lxPBS洗涤2×5 min。

4.预杂交和杂交

滴加预杂交液于载玻片上，然后置于湿盒中，50℃预杂交2小时。

弃去预杂交液，立即滴加杂交液，置于湿盒中52℃杂交过夜。

5.杂交后处理

杂交完，以后的步骤不必要特意防RNA酶。

弃去杂交液，载片浸入2xSSC中2×15 min。

载片浸入1xSSC中55℃水浴摇动2×15 min。

用含20mg/mL的RNaseA的NTE缓冲液37℃消化30分钟，以去除未结合的探针。

载片浸入5xSSC中55℃水浴摇动2×15 min。

载片浸入5xSSC中室温10 min。

6.抗体反应

用washing buffer清洗组织片5 min。

滴加封闭液缓冲液室温下处理组织片30 min。

用抗体液覆盖封闭后的组织片，置于湿盒中孵育3h以上。

Washing buffer 洗2×15 min。

Detection buffer 中平衡2-5 min。

7.显色： 加入显色液于湿盒中黑暗静止显色16h

8.封片与观察：

显色合适时，用TE buffer终止着色反应，再用蒸馏水清洗。

滴加封片剂封片，显微镜下观察和摄影。

什么是杂合性基因

即Hh，Hh就是杂合基因,Hh和hh三种类型的基因，只有出现hh时才是矮的，那么下一代的身高就会出现高矮的情况。这样的组织是不稳定。其中，因为，根据基因分离规律假设H是一对控制身高的基因，如：带有H的的基因组合都是高的，就有可能出现HH，H对h是显现的，如何父母都具有这样的基因。即Hh*Hh，前两种组合会导致高的。这里，那么就只用进行不断的自交。在育种学上如果要确定一个组合是否为纯合基因组合，就可以得出结论了，也就是这对基因是杂合：HH和Hh，即，而后一种组合会出现矮的这对基因的基因型是不同的，称为杂交基因型或杂交。假设H是一对控制身高的基因，H是可见的，即基因与H的组合是高的，如HH和HH，当HH出现时是短的。这里Hh是一个杂合基因，即这对基因是杂合的，这样的组织是不稳定的。

近交与杂交是什么？

（inbreeding and crossbreeding）

（张培杲）

近交又称近亲交配，或近亲繁殖，是指亲缘关系相近的亲体之间的交配，如半同胞交配、全同胞交配和自交等。在林木中自交指雌雄同株树种同一个体的雌雄配子的结合，或雌雄异株中全同胞异性植株之间的交配。杂交是指没有亲缘关系的或者基因型不同的亲体之间的交配。种以上分类单位之间的杂交称为远缘杂交。

近交的遗传效应是导致后代基因的分离，以及使后代群体中的遗传组成迅速趋于纯合，结果会使与生殖机能和生理效率有关的性状平均表现型值减低，即出现近交衰退现象。但通过育种措施可以利用近交改变林木群体的结构和获取纯合的育种材料。杂交恰恰与近交相反，当一些近交系间杂交时，在其子代中会使原先因近交衰退的性状由于杂种优势而得以恢复，甚至有大幅度的改进。所以利用杂交可以改良林木品种。

近交的遗传效应 有以下几种：

①雌雄同株林木的自交效应：

式中 H为杂合体；n为世代数。即每自交一代杂合体将减少一半。

②雌雄异株林木的自交效应：

即雌雄异株林木自交只能在全同胞异性植株之间进行，其杂合体减少的频率（Hn+2）为n代杂合体的1/4加上n+1代杂合体的1/2，所以杂合体减少的速度比雌雄同株林木的自交要慢些。

③其他近交类型如半同胞等的效应：半同胞等交配群体中随着世代的推移，杂合体也会逐渐减少，但减少的速率更慢，所以育种中把自交或全同胞异性植株之间的交配称作快速近亲交配，把其他近交称作慢速近亲交配。

自交、全同胞交配、半同胞交配等并不会改变群体中的基因频率，但是通过近亲繁殖会增加群体中纯合基因型的比例，从而暴露出有害隐性基因的不良作用；通过隐性体的淘汰，亦会减少群体中隐性基因的频率而增加群体中有利的显性基因的频率，甚至把若干特性在群体中固定下来。归纳起来，近亲特别是自交繁殖对群体的影响有二：①群体平均数的变化。

式中 MF为近交子代的平均数；Mo为没有进行近交以前群体的平均数；为大写基因平均频率；为小写基因平均频率。由近交所导致的群体平均数的变化是由

供给的，只要各位点杂合体基因型代表值不与纯合体的平均基因型代表值相等，不等于零，近交对群体平均数的变化就有影响。假如杂合体的基因型代表值d为正数时，近亲交配会导致群体平均数逐渐减低，即出现近交衰退现象。②导致群体遗传方差的变化，使群体中遗传方差进行重新分配，导致群体各世系的遗传分化，世系内趋于一致。

σ2M=2FVG

式中 F为自交系数；VG为遗传方差。即世系间遗传方差（σM2）等于原来在基本群体中遗传方差的二倍。因此当近交达到完全时，会使整个群体里的遗传方差完全变成了世系间的方差。近亲交配的个体常常显示出比非近亲交配的个体有较大的环境方差。其原因虽然没有完全搞清楚，但近交后代确实在顺境调节能力上有所减退，而顺境调节能力很可能是适合性的一个重要方面。

自然界自交树种都是高度近交的后代，自交乃是这类树种正常的交配方式，因此，不会发生自交衰退，也不会因偶然的杂交而显示出杂种优势。近亲繁殖的不利影响是对异交树种而言的。不过自交或近亲繁殖时，能使供试材料具有较纯的遗传组成，从而可确切地分析和比较亲本及其杂种后代的遗传差异，研究经济性状的遗传规律，有效地开展育种工作。天然异交的林木由于生命周期太长，过去较少进行人工控制的近交试验。20世纪70年代富拉克林（E.C.Franklin）等人研究表明，松属和云杉属自交有严重的自交衰退现象。茂根（F.Mergen）作欧洲云杉的自交试验，得出自交后代第一年高生长与自由授粉后代无显著差异。花旗松连续自交3代后，后代变幅很大，各自交世代均能得到一些生活力很强的个体，它们8年和10年生树高超过亲本的异交后代。南京林业大学在杉木的自交试验中，也观测到自交系间有较大变异，有的则明显衰退，有的生长超过自由授粉后代。以上试验说明，天然异交的林木通过自交也有可能获取适宜的育种材料。但为避免到达必要的近交程度前大部分自交系死亡，试验开始时必须拥有大量家系。

杂交的遗传效应 林木一般没有真正的杂种第一代（F1），所以杂种第一代的杂种优势只好按下式来推算：

式中 HF1为杂种第一代的优势；MF1为杂种第一代群体的平均数；为双亲群体平均数的平均值。当涉及的位点是多个时，HF1=Σdy2

这说明：①杂种优势的产生与近交衰退一样取决于杂合体的指定值d。d=0的位点，近交即不衰退，杂交也不产生杂种优势。②杂种优势决定于两群体间基因频率的差异程序y，当两群体基因频率无差异时，不会产生杂种优势；而当一等位基因固定于一个群体，而另一等位基因固定于另一群体中时该位点的杂种优势将最大。③如果同时涉及许多位点时，位点间d的正负不同，则虽具有杂合体的指定值d，但效应会互相抵消，而仍看不出杂种优势。

林木的杂种第二代（F2）来源于F1个体间的交配，如从一个位点为例F1A1A1的频率p（p-y），A1A2为2pq+y（p-q），A2A2为q（q+y），则F1中A1基因的频率为，A2的频率为，则

这说明F2所显示的杂种优势仅及F1杂种优势的一半，再加上。根据群体遗传平衡原则，就一个位点而论，从F2以后，只要没有其他足以使基因频率发生变化的因素存在，随后各世代群体平均数值将与F2的一样。如果涉及的位点不是一个，根据位点的数目、位点间连锁的紧密程度以及上位互作等作用，不是经一个世代就能使群体到达平衡，所以群体平均数的稳定值只能随着世代的推移或慢或快地逐渐接近。除远缘杂种之外，一般都能出现不同程度的杂种优势，所以育种中应充分利用杂种优势。