波长氨基酸是(你不知道的230、260、280)

波长氨基酸是

你不知道的事吉他谱

你不知道的230、260、280

在核酸、蛋白浓度检测过程中,230nm、260nm、280nm这几个数值经常会出现,那这几个数值代表什么?他们之间的最优关系又是什么呢?


1

230nm、260nm、280nm

230nm:碳水化合物最高吸收峰的吸收波长,与A260的比值可进行核酸样品纯度评估。A230产生负值可能是由于在低核酸浓度的样液中存在一些干扰成分。

260nm:核酸最高吸收峰的吸收波长,其吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的,所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质,不论是核苷、核苷酸或核酸在260nm处都会一个最高吸收峰。

280nm:蛋白质由于含有芳香氨基酸,因此也能吸收紫外光,通常蛋白质的吸收高峰在280nm波长处。其与260nm处的吸光度比值,经常被用于判断核酸样品的纯度。

除了这三个常见的波长外,在核酸检测过程中340nm往往会被用来检测样品缓冲液的浊度和其他干扰因子。该值应该接近0.0,如果不是,表明溶液中有悬浮物。

你不知道的230、260、280

图1. 核酸、蛋白质吸光度谱

2

260/230、260/280
纯度好的DNA或RNA,在pH7-8.5下:

A260 / A280比值应大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。

如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。

较纯净的核酸A260/A230的比值一般在1.8-2.2之间。

比值降低往往是样品中存在一些污染物,如碳水化合物、盐(胍盐)等。

但实际样品情况往往要相对复杂,如《分子克隆实验指南》(第三版)所述,当 0.5%BSA蛋白质污染时,A260和A280的数值都下降,其结果是260/280的比值略微下降。但同时,蛋白残留会导致A230的数值明显上升,进而显著影响260/230的比值。也就是说,如果样品的260/280比值略低于标准值,但260 /230下降明显,那么就应该考虑污染原因是蛋白残留,而不是胍盐残留。

酚的最大吸收峰在270nm。酚的残留会增加A230、A260和A280的数值,同时酚的吸收峰与核酸的吸收峰合并后,最大吸收峰会出现在270nm附近。因此当样品最大吸收峰会出现在270nm附近,且260/280=1~1.5, 260/230=1~1.5,那么污染原因就应该考虑是酚残留。

胍盐会在小于230nm处产生大的吸收峰,进而显著影响260/230比值,但胍盐残留不会影响A260、A280的数值,以及260/280的比值。也就是说,如果核酸样品的260/280符合要求,但260/230<1,那么污染原因就应该考虑是胍盐残留。

你不知道的230、260、280

图2. 纯DNA和受污染DNA的吸光度谱

3

其他影响因素

样品缓冲液pH?值、离子浓度等

核酸的吸光值受pH值和缓冲液离子浓度影响,只有在一定的pH值和低离子浓度的条件下(如TE),才能得到精确的检测结果。水由于pH值不稳定,可能会导致检测误差。此外一些缓冲液在紫外范围内存在自身吸收,为了确保准确测量,请使用与悬浮或洗脱样品时相同的缓冲液。

样品浓度

由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒,这些小颗粒的存在干扰测试效果,为了减少颗粒对检测结果的影响,要求样品吸光值至少大于0.1A,以减小颗粒的干扰。

操作因素

样品混合要充分,否则容易出现样品浓度重复检测波动大;混合液不能存在气泡,空白页无悬浮液,否则读数漂移剧烈;

你不知道的230、260、280,你不知道的事吉他谱

主题测试文章,只做测试使用。发布者:氨基酸肥料,转转请注明出处:https://www.028aohe.com/16917.html

(0)
氨基酸肥料氨基酸肥料
上一篇 2022年8月13日 下午3:04
下一篇 2022年8月13日 下午3:07

相关推荐

  • 线椒和青尖椒哪个辣

         回答线椒一般比青尖椒要辣一点。线椒的特点是果实小羊角形,果长25-30厘米,果面光滑,果顶渐尖且微弯,青熟果实呈绿色,老熟果实呈红色;尖椒的果实呈细长的纺锤状,特点是下端有个尖,身形细长,果面光滑,果顶渐尖且基本上没有弯度,青熟果实呈绿色,老熟果实呈红色。

    肥料资讯 2022年4月4日
    00
  • 大蒜粉(大蒜粉喂鸡的功效与作用)

    大蒜粉可以做什么吃的 大蒜粉可以做的吃的方法如下 1、烤鸡翅 大蒜粉平时可以用来烤制蒜香鸡翅,在烤鸡翅以前需要准备新鲜的鸡翅,把它用清水洗净,再控干表面的水分,加入白糖和生抽以及蒜香粉还有少量食用盐和小茴香等调味料一起腌制,腌好以后入烤箱烤熟就可以。 2、腌羊肉 每年夏天都是人们吃羊肉串的好时候,这时很多人都喜欢自己在家中烤羊肉串,于是羊肉的腌制就成了大问题…

    肥料资讯 2023年1月12日
    00
  • 葵花要怎么种

      葵花,学名“向日葵”,一年生草本,高1~3米。茎直立,粗壮,圆形多棱角,被白色粗硬毛。   俗称葵花子。      那么葵花要怎么 种植 呢以下就是我给你做的整理,希望对你有用。 葵花的介绍 中文学名:向日葵 拉丁学名:Helianthus annuus 别称:朝阳花、转日莲、向阳花、望日莲 界:植物界 门:被子植物门 Magnoliophyta 纲:双…

    肥料资讯 2023年3月3日
    00
  • 氨基和氨基酸(四个招式,教你如何选酱油)

    氨基和氨基酸 #化学# #化合物百科# 丙氨酸,简写为Ala或A,亦称2-氨基丙酸,是组成人体蛋白质的20种氨基酸之一,在营养学中属人体非必需的氨基酸。 如何选用酱油 废话不多说,直接进入正题。 第一招,看类型 酱油一般分为酿造酱油和配制酱油。酿造酱油是由大豆或脱脂大豆发酵之后加入一些配料而制成;配制酱油是由酿造酱油和酸水解植物蛋白调味液的混合物。相比而言,…

    肥料资讯 2022年8月20日
    00
  • 兽用氨基酸和氨基酸区别(养猪的朋友,你一定要分清蛋白质、小肽、氨基酸)

    兽用氨基酸和氨基酸区别 #羊奶粉##绵羊奶粉##好奶源于好牧场#经常喝奶粉的朋友都知道,选购奶粉的三部曲:1、看品牌(包括生产厂家)2、看配料3、看奶源 这款元生爱特乳铁蛋白绵羊奶粉,作为一款新兴品牌不为大众所知,但是提到它的生产厂家陕西雅泰爱贝乳业有限公司(简称:雅泰乳业)相对来说一点都不陌生,旗下有:朵恩、珍纽倍、馨贝贝等知名品牌。所以虽然是一个新兴品牌…

    肥料资讯 2022年8月30日
    00

联系我们

400-800-8888

在线咨询: QQ交谈

邮件:admin@example.com

工作时间:周一至周五,9:30-18:30,节假日休息

关注微信
自6.2开始主题新增页头通知功能,购买用户可免费升级到最新版体验