肥料总氨基酸测定方法是(氨基酸测定方法)

肥料总氨基酸测定方法是

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标准号：NY 525—2002

标准名称：有机肥料

标准分类：农业土壤化肥标准

1范围

本标准规定了有机肥料的技术要求、试验方法、检测规则、标识、包装、运输和贮存。

本标准适用于以畜禽粪便、动植物残体等富含有机质的副产品资源为主要原料，经发酵腐熟后制成的有机肥料。

本标准不适用于绿肥、农家肥和其他农民自积自造的有机粪肥。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T601化学试剂滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备

GB/T1250极限数值的表示方法和判定方法

GB/T6679固体化工产品采样通则

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB8172城镇垃圾农用控制标准

GB/T8576复混肥料中游离水含量测定真空烘箱法

GB18382肥料标识内容和要求

3术语和定义

下列术语和定又适用于本标准。

有机肥料 organicfertilizer

主要来源于植物和（或）动物，施于土壤以提供植物营养为其主要功能的合碳物料。

4要求

4.1外观；有机肥料为褐色或灰褐色，粒状或粉状，无机械杂质，无恶臭。

4.2有机肥料的技术指标应符合表1的要求。

表1有机肥料的技术指标

项目指标

有机质含量（以干基计）/（%）≥ 30

总养分（氮+五氧化二磷+氧化钾）含量（以干基计）/（%）≥ 4.0

水分（游离水）含量/（%）≤ 20

酸碱度 pH 5.5-8.0

4.3有机肥料中的重金属含量、蛔虫卵死亡率和大肠杆菌值指标应符合 GB8172的要求。

5试验方法

本标准中所用水应符合 GB/T6682中三级水的规定。所列试剂，除注明外，均指分析纯试剂。试验中所需标准溶液，按 GB/T601规定制备。

5.1外观

目视、鼻嗅测定。

5.2有机质含量测定（重铬酸钾容量法）

5.2.1方法原理

用定量的重铬酸钾—硫酸溶液，在加热条件下，使有机肥料中的有机碳氧化，多余的重铬酸钾用硫酸亚铁溶液滴定，同时以二氧化硅为添加物作空白试验。根据氧化前后氧化剂消耗量，计算有机碳含量，乘以系数1.724，为有机质含量。

5.2.2仪器、设备

通常实验室用仪器设备。

5.2.3试剂及制备

5.2.3.1二氧化硅：粉末状。

5.2.3.2浓硫酸（ρ1.84）。

5.2.3.3重铬酸钾（ K2Cr2O7）标准溶液：c〔1/6（K2Cr2O7）〕=1mol/L。

称取经过130℃烘3h-4h的重铬酸钾（分析纯）49.031g，溶解于400mL水中，必要时可加热溶解，冷却后，稀释定客至1L，摇匀备用。

5.2.3.4重铬酸钾标准溶液：c〔1/6（K2Cr2O7）〕=0.1mol/L。

取c〔1/6（K2Cr2O7）〕=1mol/mL，标准溶液（5.2.3.3）100L加水稀释定容至1L，摇匀备用。

5.2.3.5硫酸亚铁（FeSO4）标准溶液：c（FeSO4）=0 2mol/L。

称取（FeSO4•7H2O）（分析纯）55 6g，加水和 c（1/2H2SO4）=6mol/L的硫酸30mL溶解，稀释定容到1L，摇匀备用。此溶液的准确浓度以0.1mol/L重铬酸钾标准溶液（5.2.3.4）标定，现用现标定。

c（FeSO4）=0.2mol/L标准溶液的标定：吸取重铬酸钾标准溶液（5.2.3.4）20.00mL加入150mL三角瓶中，加浓硫酸（5.2.3.2）3mL-5mL和2滴-3滴邻啡口罗啉指示剂（5.2.3.6），用硫酸亚铁标准溶液（5.2.3.5）滴定。根据硫酸亚铁标准溶液滴定时的消耗量按式（1）计算其准确浓度 c：

c1×V1

c=……………………………（1）

V2

式中：c1———重铬酸钾标准溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；

V1———吸取重铬酸钾标准溶液的体积，单位为毫升（mL）；

V2———滴定时消耗硫酸亚铁标准溶液的体积，单位为毫升（mL）。

5.2.3.6邻啡口罗啉指示剂：称取硫酸亚铁（分析纯）0.695g和邻啡口罗啉（分析纯）1.485g溶

于100mL水中，摇匀备用。

5.2.4测定步骤

称取过Φ0.5mm筛的风干试样0.3g-0.5g（精确至0.0001g），置于500mL的三角瓶中，准确加入1mol/L重铬酸钾标准溶液（5.2.3.3）30.00mL，充分摇匀后加浓硫酸60mL，缓缓摇动1min，加一弯颈小漏斗，置于沸水中保温30min，每隔约5min摇动一次。取出冷却至室温，用水冲洗小漏斗，洗液承接于三角瓶中。取下三角瓶，将反应物无损转入250mL容量瓶中，定容，吸取50mL溶液于250mL三角瓶内，加水约100mL，加2-3滴邻啡口罗啉指示剂（5.2.3.6），用0.2mol/L硫酸亚铁标准溶液（5.2.3.5）滴定近终点时，溶液由绿色变成暗绿色，再逐滴加入硫酸亚铁标准溶液直至生成砖红色为止。同时称取0.2g（精确至0.001g）二氧化硅（5.2.3.1）代替试样，按照相同分析步骤，使用同样的试剂，进行空白验。

如果滴定试样所用硫酸亚铁标准溶液的用量不到空白试验所用硫酸亚铁标准溶液用量的三分之一时，则应减少称样量，重新测定。

5.2.4分析结果的表述

肥料有机质含量以肥料的质量分数表示，按式（2）计算：

c×（V0-V）×0.003×1.724

有机质（%）=×100………………（2）

m×（1-X0）×D

式中：c———硫酸亚铁标准溶液的摩尔浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；

V0———空白试验时，使用硫酸亚铁标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL）；

V———测定时，使用硫酸亚铁标准溶液的体积，单位为毫升（mL）；

0.003———四分之一碳原子的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol）；

1.724———由有机碳换算为有机质的系数；

m———试样质量，单位为克（g）；

X0———风干试样的含水量；

D———稀释倍数：50/250。

5.2.6允许差

5.2.6.1取平行分析结果的算术平均值为最终分析结果。

5.2.6.2平行测定的绝对差值应符合表2要求。

表2

有机质/（%）绝对差值/（%）

<30 0.6

30-45 0.8

>45 1.0

不同实验室测定结果的绝对差值应符合表3要求。

表3

有机质/（%）绝对差值/（%）

<30 1.0

30-45 1.5

>45 2.0

5.3全氮含量测定

5.3.1方法原理

有机肥料中的有机氮经硫酸-过氧化氢消煮，转化为铵态氮。碱化后蒸馏出来的氨用硼酸溶液吸收，以标准酸溶液滴定，计算样品中全氮含量。

5.3.2试剂

5.3.2.1硫酸（ρ1.84）。

5.3.2.2 30%过氧化氢。

5.3.2.3氢氧化钠：质量浓度为40%的溶液。

称取40g氢氧化钠（化学纯）溶于100mL水中。

5.3.2.4硼酸：质量浓度为2%的溶液。

称取2g硼酸溶于100mL约60℃热水中，冷却，用稀碱在酸度计上调节溶液 pH=4 5。

5.3.2.5定氮混合指示剂：称取0.5g溴甲酚绿和0.1g甲基红溶于100mL95%乙醇中。

5.3.2.6硫酸〔c（1/2H2SO4）=0.05mol/L〕或盐酸〔c（HCl）=0.05mol/L〕标准溶液：配制和

标定，按照 GB/T601进行。

5.3.3仪器、设备

通常实验室用仪器设备和定氮蒸馏装置。

5.3.4分析步骤

5.3.4.1试样溶液制备

称取过φ0.5mm筛的风干试样0.5g（精确至0.0001g），置于开氏烧瓶底部，用少量水冲洗沾附在瓶壁上的试样，加5.0mL硫酸（5.3.2.1）和1.5mL过氧化氢（5.3.2.2），小心匀，瓶口放一弯颈小漏斗，放置过夜。在可调电炉上缓慢升温至硫酸冒烟，取下，稍冷后加15滴过氧化氢，轻轻摇动开氏烧瓶，加热10min，取下，稍冷后分次再加5-10滴过氧化氢并分次消煮，直至溶液呈无色或淡黄色清液后，继续加热10min，除尽剩余的过氧化氢。取下稍冷，小心加水至20mL-30mL，加热至沸。取下冷却，用少量水冲洗弯颈小漏斗，洗液收入原开氏烧瓶中。将消煮液移入100mL容量瓶中，加水定容，静置澄清或用无磷滤纸干过滤到具塞三角瓶中，备用。

5.3.4.2空白试验

除不加试样外，试剂用量和操作同5.3.4.1。

5.3.4.3测定

5.3.4.3.1蒸馏前检查蒸馏装置是否漏气，并进行空蒸馏清洗管道。

5.3.4.3.2吸取消煮清液50.0mL于蒸馏瓶内，加入200mL水。于250mL三角瓶加入10mL硼酸溶液（5.3.2.4）和5滴混合指示剂（5.3.2.5）承接于冷凝管下端，管口插入硼酸液面中。由筒型漏斗向蒸馏瓶内缓慢加入15mL氢氧化钠溶液（5.3.2.3），关好活塞。加热蒸馏，待馏出液体积约100mL，即可停止蒸馏。

5.3.4.3.3用硫酸标准溶液或盐酸标准溶液（5.3.2.6）滴定馏出液，由蓝色刚变至紫红色为终点。记录消耗酸标准溶液的体积（mL）。空白测定所消耗酸标准溶液的体积不得超过0.1mL。

5.3.5分析结果的表述

肥料的全氮含量以肥料的质量分数表示，按式（3）计算：

（V-V0）×c×0.014×D

全氮（N）（%）=×100……………（3）

m×（1-X0）

式中：V———试液滴定消耗标准酸溶液的体积，单位为毫升（mL）；

V0———空白滴定消耗标准酸溶液的体积，单位为毫升（mL）；

c———酸标准溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L）；

0.014———氮的摩尔质量，单位为克每摩尔（g/mol）；

D———分取倍数，定容体积/分取体积，100/50；

m———称取试样质量，单位为克（g）；

X0———风干试样的含水量。

所得结果应表示至两位小数。

5.3.6允许差

5.3.6.1取两个平行测定结果的算术平均值作为测定结果。

5.3.6.2两个平行测定结果允许绝对差应符合表 4要求。

表4

氮（N）/（%）允许差/（%）

<0.50<0.02

0.50-1.00<0.04

>1.00<0.06

5.4全磷含量测定

5.4.1方法原理

有机肥料试样采用硫酸和过氧化氢消煮，在一定酸度下，待测液中的磷酸根离子与偏钒酸和钼酸反应形成黄色三元杂多酸。在一定浓度范围〔1mg/L! 20mg/L：磷（P）〕内，黄色溶液的吸光度与含磷量呈正比例关系，用分光光度法定量磷。

5.4.2试剂

5.4.2.1硫酸（ρ1.84）。

5.4.2.2硝酸。

5.4.2.3 30%过氧化氢。

5.4.2.4钒钼酸铵试剂：

A液：称取25.0g钼酸铵溶于400mL水中。

B液：称取1.25g偏钒酸铵溶于300mL沸水中，冷却后加250mL硝酸（5.4.2.2），冷却。在搅拌下将A液缓缓注入B液中，用水稀释至1L，混匀，贮于棕色瓶中。

5.4.2.5氢氧化钠：质量浓度为10%的溶液。

5.4.2.6硫酸（5.4.2.1）：体积分数为5%的溶液。

5.4.2.7磷标准溶液：50μg/mL。

称取0.2195g经105℃烘干2h的磷酸二氢钾（优级纯），用水溶解后，转入1L容量瓶中，加入5mL硫酸（5.4.2.1），冷却后用水定容至刻度。该溶液1mL含磷（P）50μg。

5.4.2.8 2，4-（或 2，6-）二硝基酚指示剂：质量浓度为0.2%的溶液。称取0.2g2，4-（或2，6-）二硝基酚溶于100mL水中（饱和）。

5.4.2.9无磷滤纸。

5.4.3仪器、设备

通常实验室用仪器设备。

5.4.4分析步骤

5.4.4.1试样溶液制备

称取过φ0.5mm筛的风干试样0.3g-0.5g，按5.3.4.1操作制备。

5.4.4.2空白溶液制备

除不加试样外，应用的试剂和操作同5.4.2.1。

5.4.4.3测定

吸取5.00mL-10.00mL试样溶液（5.4.4.1）（含磷0.05mg-1.0mg）于50mL容量瓶中，加水至30mL左右，与标准溶液系列同条件显色、比色，读取吸光度。

5.4.4.4校准曲线绘制

吸取磷标准溶液（5.4.2.7）0，1.0，2.5，5.0，7.5，10.0，15.0mL分别置于7个50mL容量瓶中，加入与吸取试样溶液等体积的空白溶液，加水至30mL左右，加2滴2，4-（或 2，6-）二硝基酚指示剂溶液（5.4.2.8），用氢氧化钠溶液（5.4.2.5）和硫酸溶液（5.4.2.6）调节溶液刚呈微黄色，加10.0mL钒钼酸铵试剂（5.4.2.4），摇匀，用水定容。此溶液为 1mL含磷（P）0，1.0，2.5，5.0，7.5，10.0，15.0μg的标准溶液系列。在室温下放置20min后，在分光光度计波长440nm处用1cm光径比色皿，以空白溶液调节仪器零点，进行比色，读取吸光度。根据磷浓度和吸光度绘制标准曲线或求出直线回归方程。

5.4.5分析结果的表述

肥料的全磷含量以肥料的质量分数表示，按式（4）计算：

c×V×D

全磷（P2O5）（%）=×2.29×10-4…………………（4）

m×（1-X0）

式中：c———由校准曲线查得或由回归方程求得显色液磷浓度，单位为微克每毫升（μg/

mL）；

V———显色体积，50mL；

D———分取倍数，定容体积/分取体积，100/5或 100/10；

m———称取试样质量，单位为克（g）；

X0———风干试样的含水量；

2.29———将磷（P）换算成五氧化二磷（P205）的因数；

10-4———将μg/g换算为质量分数的因数。

所得结果应表示至两位小数。

5.4.6允许差

5.4.6.1取两个平行测定结果的算术平均值作为测定结果。

5.4.6.2两个平行测定结果允许绝对差应符合表5要求。

表5

磷（P2O5）/（%）允许差/（%）

<0.50<0.02

0.50-1.00<0.03

>1.00<0.04

5.5全钾含量测定

5.5.1方法原理

有机肥料试样经硫酸和过氧化氢消煮，稀释后用火焰光度法测定。在一定浓度范围内，溶液中钾浓度与发光强度呈正比例关系。

5.5.2试剂

5.5.2.1硫酸（ρ1.84）。

5.5.2.2 30%过氧化氢。

5.5.2.3钾标准贮备溶液：1mg/mL。

称取1.9067g经100℃烘2h的氯化钾，用水溶解后定容至1L。该溶液1mL含钾（K）1mg，贮于塑料瓶中。

5.5.2.4钾标准溶液：100μg/mL。

吸取10.00mL钾（K）标准贮备溶液（5.5.2.3）于100mL容量瓶中，用水定容，此溶液1mL含钾（K）100μg。

5.5.3仪器、设备

通常实验室用仪器设备。

5.5.4分析步骤

5.5.4.1试样溶液制备

按5.3.4.1制备。

5.5.4.2空白溶液制备

除不加试样外，应用的试剂和操作同5.5.4.1。

5.5.4.3测定

吸取5.00mL试样溶液（5.5.4.1）于 50mL容量瓶中，用水定容。与标准溶液系列同条件在火焰光度计上测定，记录仪器示值。每测量5个样品后须用钾标准溶液校正仪器。

5.5.4.4校准曲线绘制

吸取钾标准溶液（5.5.2.4）0，2.50，5.00，7.50，10.00mL分别置于5个50mL容量瓶中，加入与吸取试样溶液等体积的空白溶液，用水定容，此溶液为 1mL含钾（K）0，5.00，10.00，15.00，20.00μg的标准溶液系列。在火焰光度计上，以空白溶液调节仪器零点，以标准溶液系列中最高浓度的标准溶液，调节满度至80分度处。再依次由低浓度至高浓度测量其他标准溶液，记录仪器示值。根据钾浓度和仪器示值绘制校准曲线或求出直线回归方程。

5.5.5分析结果的表述

肥料的全钾含量以肥料的质量分数表示，按式（5）计算：

c×V×D

全钾（K2O）（%）=×1.20 10-4…………………（5）

m×（1-X0）

式中：c———由校准曲线查得或由回归方程求得测定液钾浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；

V———测定体积，本操作为50mL；

D———分取倍数，定容体积/分取体积，100/5；

m———称取试样质量，单位为克（g）；

X0———风干试样的含水量；

1.20———将钾（K）换算成氧化钾（K2O）的因数；

10-4———将%g/g换算为质量分数的因数。

所得结果应表示至两位小数。

5.5.6允许差

5.5.6.1取两个平行测定结果的算术平均值作为测定结果。

5.5.6.2两个平行测定结果允许绝对差应符合表 6要求。

表6

钾（K2O）/（%）允许差/（%）

<0.60<0.05

0.6-1.20<0.07

1.20-1.80<0.09

>1.80<0.12

5.6水分含量测定（真空烘箱法）

按 GB/T8576进行，分别测定鲜样含水量、风干样含水量（X0）。

5.7酸碱度的测定（pH计法）

5.7.1方法原理

试样经水浸泡平衡，直接用 pH酸度计测定。

5.7.2仪器

通常实验室用仪器和 pH酸度计。

5.7.3试剂和溶液

5.7.3.1 pH4 01标准缓冲液：称取经110℃烘1h的邻苯二钾酸氢钾（KHC8H4O4）10.21g，用水溶解，稀释定容至1L。

5.7.3.2 pH6 87标准缓冲液：称取经120℃烘2h的磷酸二氢钾（KH2PO4）3.398g和经120-130℃烘 2h的无水磷酸氢二钠（Na2HPO4）3.53g，用水溶解，稀释定容至1L。

5.7.3.3 pH9 18标准缓冲液：称取硼砂（Na2B4O7•10H2O）（在盛有蔗糖和食盐饱和溶液的

干燥器中平衡一周）3.8g，用水溶解，稀释定容至1L。

5 7 4操作步骤

称取试样 5 0g于 100mL烧杯中，加 50mL水（经煮沸驱除二氧化碳），搅动 15min，静置

30min，用 pH酸度计测定。

5 7 5允许差

取平行分析结果的算术平均值为最终分析结果，保留一位小数。平行分析结果的绝对差值不大于 0 2pH单位。

5 8重金属含量、蛔虫卵死亡率和大肠杆菌值的测定

按 GB8172进行。

6检验规则

6 1本标准中质量指标合格判断，采用 GB/T1250中“修约值比较法”。

6 2有机肥料应由生产企业质量监督部门进行检验，生产企业应保证所有出厂的有机肥料均符合本标准 4 1和 4 2的要求。每批出厂的产品应附有质量证明书，其内容包括：企业名称、产品名称、批号、产品净重、养分总含量、生产日期和本标准号。

6 3重金属含量、蛔虫卵死亡率和大肠杆菌值为型式检验项目，有下列情况时应检测；

a）正式生产时，原料、工艺发生变化；

b）正式生产时，定期或积累到一定量后，应周期性进行一次检验；

c）国家质量监督机构提出型式检验的要求时。

6 4如果检验结果中有一项指标不符合本标准要求时，应重新自二倍量的包装袋中选取有机肥料样品进行复验；重新检验结果，即使有一项指标不符合本标准要求时，则整批肥料作不合格处理。

6 5采样

6 5 1抽样方法

商品有机肥料产品抽样方法见表 7。

表 7有机肥料产品抽样方法

总袋数取样袋数总袋数取样袋数总袋数取样袋数

1! 10全部袋数 102! 125 15 255! 296 20

11! 49 11 126! 151 16 297! 343 21

50! 64 12 152! 181 17 344! 394 22

65! 81 13 182! 216 18 395! 450 23

82! 101 14 217! 254 19 451! 512 24

总袋数超过 512袋时，取样袋数按式（6）计算：

取样袋数=3 3(N…………………………（6）

式中：

N———每批取样总袋数。

将抽出的样品袋平放，每袋从最长对角线插入取样器到四分之三处，取不少于 100g样品，每批抽取样品总量不少于 2kg。

6 5 2散装产品

散装产品取样时，按 GB/T6679规定进行。

6 5 3样品缩分

将选取的样品迅速混匀，用四分法将样品缩分到 1000g，分装于三个干净的广口瓶中，密封、贴上标签，注明生产企业名称、产品名称、批号、取样日期、取样人姓名，一瓶供物

理分析，一瓶风干，一瓶保存 2个月，以备查用。

7包装、标识、运输和贮存

7 1有机肥料用覆膜编织袋或塑料编织袋衬聚乙烯内袋包装。每袋净含量（50 0 5）kg、（40 0 4）kg、（25 0 25）kg，平均每袋净含量不得低于 50 0kg、40 0kg、25 0kg。

7 2有机肥料包装袋上应注明：产品名称、商标、有机质含量、总养分含量、净重、标准号、登记证号、企业名称、厂址。其余按 GB18382执行。

7 3有机肥料应贮存于阴凉干燥处，在运输过程中应防潮、防晒、防破裂。

望采纳，谢谢

氨基酸测定方法

游离氨基酸的测定常用方法为法茚三酮显色。

茚三酮反应是指在加热条件及弱酸环境下，氨基酸或肽与茚三酮反应生成紫蓝色化合物及相应的醛和二氧化碳的反应，与脯氨酸或羟脯氨酸反应生成（亮）黄色化合物。该反应可以对氨基酸进行定性或定量分析，可用于法医学上犯罪嫌疑人的指纹采集。

此反应十分灵敏，根据反应所生成的蓝紫色的深浅，用分光光度计在570nm波长下进行比色就可测定样品中氨基酸的含量（在一定浓度范围内，显色溶液的吸光率与氨基酸的含量成正比），也可以在分离氨基酸时作为显色剂对氨基酸进行定性或定量分析。

原理：氨基酸为水溶性物质，在pH为8.0的缓冲溶液中与茚三酮同时加热，可形成紫色络合物，在吸收波长570纳米处可检出光密度值，从而计算出游离氨基酸总量。该法已被列为国家标准（GB/T8314-87）。检测方法稳定可靠，重现性好，设备简单操作方便。

游离氨基酸反应机理：

除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应生成黄色物质外，所有的α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。

该反应分两步进行，第一步是氨基酸被氧化，产生CO2、NH3和醛，而水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所生成之还原型茚三酮与另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。

此反应的适宜pH为5—7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。该反应十分灵敏，1：1500000浓度的氨基酸水溶液即能显示反应，因此是一种常用的氨基酸定量方法。

但也有些物质对茚三酮也呈类似的阳性反应，如β-丙氨酸、氨和许多一级胺化合物等。所以定性或定量测定中，应严防干扰物存在。

氨基酸液相检测方法

1.分光光度法氨基酸检测：主要是利用氨基酸与衍生剂发生化学反应，产生蓝紫色化合物，该化合物在某一波长处有最大吸收峰，根据吸收值大小得到氨基酸含量。常用的衍生剂为茚三酮。

2.毛细管电泳法氨基酸检测：根据分离原理的不同，可分为毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等电电泳、毛细管等速电泳以及胶束电动力学毛细管电泳。其中，毛细管区带电泳和胶束电动力学毛细管电泳可用于氨基酸检测。

3.近红外光谱法氨基酸检测：利用有机化合物的含氢基团在特定波长区域跃迁，产生光谱的变化，结合统计学方法间接地实现氨基酸的定量检测。

4.气相色谱法氨基酸检测：将氨基酸衍生化处理变为容易气化的物质，根据气态样品中各组分在流动相和固定相中的分配系数的不同，实现对氨基酸的定量分析。

5.高效液相色谱法氨基酸检测：是最常用的一种氨基酸检测方法。由于大多数氨基酸本身没有紫外吸收和荧光反应，因此需要对样品进行衍生化处理将其转化为有紫外吸收和发射荧光的物质，衍生可分为柱前衍生和柱后衍生。

氨基酸定量测定的方法有哪些

定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。考马斯亮蓝法（Bradford法）。

凯氏定氮灵敏度低，适用于0.2~ 1.0mg氮，误差为±2％费时

8～10小时将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长

双缩脲法（Biuret法）灵敏度低 1～20mg中速 20~30分钟多肽键＋碱性Cu2＋®紫色络合物硫酸铵；Tris缓冲液；某些氨基酸用于快速测定，但不太灵敏；不同蛋白质显色相似

紫外吸收法较为灵敏 50～100mg快速 5～10分钟蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收各种嘌吟和嘧啶；

Folin－酚试剂法（Lowry法）灵敏度高～5mg慢速 40～60分钟双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；

各种硫醇耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化

考马斯亮蓝法(Bradford法)灵敏度最高 1～5mg快速5～15分钟考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其lmax由465nm变为595nm强碱性缓冲液；

SDS最好的方法；干扰物质少；颜色稳定；颜色深浅随不同蛋白质变化

氨基酸含量测定

1.原理

在用盐酸水解蛋白质的过程中，胱氨酸易被破坏，现多采用过甲酸氧化法将蛋白质中的胱氨酸及半胱氨酸氧化成半胱磺酸，其反应如下：

SH NH2 O SO3H NH2 O

CH2 CH COOH+3H C OOH CH2 CH COOH+3H C OH

半胱氨酸过甲酸半胱磺酸甲酸

生成的半胱磺酸可在氨基酸自动分析仪上进行测定，与标准半胱磺酸比较，计算其含量。

2.适用范围

参照中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所编写的食物营养成分测定法第三版。适用于食物中胱氨酸的测定。

3.仪器

水解瓶：耐压螺盖玻璃管或硬质试管，体积20～30mL，用去离子水冲净并烘干，电热减压蒸发器。

4.试剂

过甲酸：取9mL分析纯甲酸加入1mL30%过氧化氢混合，在室温放置2小时以上。

5.操作步骤

5.1过甲酸氧化：称取一定量的食物样品置于水解瓶中，使样品含蛋白质在5～10mg，加入1mL过甲酸试剂，在室温放置3小时。加1mL乙醇终止氧化。将样品瓶置于电热减压器中，于45℃减压蒸干，用1mL去离子水淋洗瓶壁，再蒸干，反复3次，以除去过甲酸。

5.2盐酸水解：同食物中氨基酸（16种）测定方法

5.3在Bekman6300氨基酸自动分析仪上，在注文50℃时用pH3.25柠檬酸缓冲液洗脱，半胱磺酸的出峰时间约在1.78分钟。

6.计算

上机样品液（50μl）中半胱磺酸量=

上机标准液中半胱磺酸量（nmol）×样品峰面积

半胱磺酸标准峰面积

100g样品中胱氨酸mg数=

上机样品中半胱磺酸量（nmol）×D×M×100

W×E×106×2

式中

D：样品稀释倍数

M：胱氨酸分子量（ng）

W：称样量（g）

E：上机时的进样量（此处为50μl）

氨基酸测定仪

优点 1.分析可以再设备普通的实验室里进行

2.能够分析大量的样品。因为通过仔细的计划，好几批试样可以同时分析以及为分析

做好准备

3.原始数据能够容易的处理以供在计算机中进一步求值

4.检测极限也从最初的u mol,级提高到p mol级

5.氨基酸不用柱前衍生，直接上样进行分析，操作步骤简单，故是迄今氨基酸定性、定量分析中应用最广泛的方法之一。柱后衍生试剂除茚三酮外，还有可用荧光检测的邻苯二甲醛，使检测灵敏度得以提

高，已达5-10 mol

缺点：（1）由于仪器结构复杂，造成价格昂贵；（2）离子交换树脂易压缩，流动相流速的加快不与压力的增加成比例，故测定时间相对较长；（3）氨基酸经离子交换柱分离，在柱后与水合茚三酮衍生剂混合进行反应，势必造成柱后扩散比较大，峰形变宽，分辨率降低；（4）有些柱后衍生剂如邻苯二甲醛虽能用灵敏的荧光检测，但不能与亚氨基反应，故不能检测脯氨酸。