氨基酸含量测定
1.原理
在用盐酸水解蛋白质的过程中,胱氨酸易被破坏,现多采用过甲酸氧化法将蛋白质中的胱氨酸及半胱氨酸氧化成半胱磺酸,其反应如下:
SH NH2 O SO3H NH2 O
CH2 CH COOH+3H C OOH CH2 CH COOH+3H C OH
半胱氨酸过甲酸半胱磺酸甲酸
生成的半胱磺酸可在氨基酸自动分析仪上进行测定,与标准半胱磺酸比较,计算其含量。
2.适用范围
参照中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所编写的食物营养成分测定法第三版。适用于食物中胱氨酸的测定。
3.仪器
水解瓶:耐压螺盖玻璃管或硬质试管,体积20~30mL,用去离子水冲净并烘干,电热减压蒸发器。
4.试剂
过甲酸:取9mL分析纯甲酸加入1mL30%过氧化氢混合,在室温放置2小时以上。
5.操作步骤
5.1过甲酸氧化:称取一定量的食物样品置于水解瓶中,使样品含蛋白质在5~10mg,加入1mL过甲酸试剂,在室温放置3小时。加1mL乙醇终止氧化。将样品瓶置于电热减压器中,于45℃减压蒸干,用1mL去离子水淋洗瓶壁,再蒸干,反复3次,以除去过甲酸。
5.2盐酸水解:同食物中氨基酸(16种)测定方法
5.3在Bekman6300氨基酸自动分析仪上,在注文50℃时用pH3.25柠檬酸缓冲液洗脱,半胱磺酸的出峰时间约在1.78分钟。
6.计算
上机样品液(50μl)中半胱磺酸量=
上机标准液中半胱磺酸量(nmol)×样品峰面积
半胱磺酸标准峰面积
100g样品中胱氨酸mg数=
上机样品中半胱磺酸量(nmol)×D×M×100
W×E×106×2
式中
D:样品稀释倍数
M:胱氨酸分子量(ng)
W:称样量(g)
E:上机时的进样量(此处为50μl)
氨基酸含量测定方法
其实这个是相对的!游离氨基酸的测定主要是在样品处理的实际防止将蛋白质水解成游离氨基酸,起后面的测定就看你要的结果,如果是要总含量就用一般的紫外就可以搞定,如果你想知道样品中游离氨基酸的种类那最简单的还是用高效液相色谱法啊!不知道说的你满不满意,请纠正.小萧
食品中氨基酸的测定方法
氨基酸(amino acids):含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称。生物功能大分子蛋白质的基本组成单位,是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物,氨基一般连在α-碳上。
氨基酸的结构通式:构成蛋白质的氨基酸都是一类含有羧基并在与羧基相连的碳原子下连有氨基的有机化合物,目前自然界中尚未发现蛋白质中有氨基和羧基不连在同一个碳原子上的氨基酸。
其理化特性大致有:
1)都是无色结晶。熔点约在230°C以上,大多没有确切的熔点,熔融时分解并放出CO2;都能溶于强酸和强碱溶液中,除胱氨酸、酪氨酸、二碘甲状腺素外,均溶于水;除脯氨酸和羟脯氨酸外,均难溶于乙醇和乙醚。
2)有碱性[二元氨基一元羧酸,例如赖氨酸(lysine)];酸性[一元氨基二元羧酸,例如谷氨酸(Glutamic acid)];中性[一元氨基一元羧酸,例如丙氨酸(Alanine)]三种类型。大多数氨基酸都呈显不同程度的酸性或碱性,呈显中性的较少。所以既能与酸结合成盐,也能与碱结合成盐。
3)由于有不对称的碳原子,呈旋光性。同时由于空间的排列位置不同,又有两种构型:D型和L型,组成蛋白质的氨基酸,都属L型。由于以前氨基酸来源于蛋白质水解(现在大多为人工合成),而蛋白质水解所得的氨基酸均为α-氨基酸,所以在生化研究方面氨基酸通常指α-氨基酸。至于β、γ、δ……ω等的氨基酸在生化研究中用途较小,大都用于有机合成、石油化工、医疗等方面。氨基酸及其衍生物品种很多,大多性质稳定,要避光、干燥贮存。
1、茚三酮反应(ninhydrin reaction)
ninhydrin reaction
在加热条件下,氨基酸或肽与茚三酮反应生成紫色(与脯氨酸反应生成红色)化合物的反应。
茚三酮反应,即:所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽与茚三酮反应都产生蓝紫色物质,只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生黄色物质。
此反应十分灵敏,根据反应所生成的蓝紫色的深浅,在570nm波长下进行比色就可测定样品中氨基酸的含量,也可以在分离氨基酸时作为显色剂对氨基酸进行定性或定量分析。在法医学上,使用茚三酮反应可采集嫌疑犯在犯罪现场留下来的指纹。因为手汗中含有多种氨基酸,遇茚三酮后起显色反应。
2、坂口反应(Sakaguchi reaction)
坂口反应;Sakaguchi reaction
本法广泛用于精氨酸的分析与测定。精氨酸与α-萘酚在碱性次溴酸钠(或次溴酸钾)中发生反应,得到如左式的红色产物:当用茚三酮方法发现可能有精氨酸时,可用此法检测确证。单取代的胍基衍生物如章鱼肉碱、胍基乙酸等对此反应敏感,显示正反应。该反应可用于精氨酸的定性和定量测定。
3、米隆反应
HgNO3+HNO3+热红色(检验酚基酪氨酸有此反应)
4、Folin-Ciocalteau反应
磷钨酸-磷钳酸蓝色(检验酚基酪氨酸有此反应)
5、黄蛋白反应
浓硝酸煮沸黄色(检验苯环酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸有此反应)
6、Hopkin-Cole反应(乙醛酸反应)
乙醛酸+浓硫酸乙醛与浓硫酸接触面处产生紫红色环(检验吲哚基色氨酸有此反应)
7、Ehrlich反应
P-二甲氨基苯甲醛+浓盐酸蓝色(检验吲哚基色氨酸有此反应)
8、硝普盐试验
Na2(NO)Fe(CN)2*2H2O+稀氨水红色(检验巯基半胱氨酸有此反应)
9、Sulliwan反应
1,2萘醌、4磺酸钠+Na2SO3红色(检验巯基半胱氨酸有此反应)
10、Folin反应
1,2萘醌、4磺酸钠在碱性溶液深红色(检验α-氨基酸)
据我了解武汉武达生物科技用头发提取氨基酸技术生产的胱氨酸、亮氨酸、酪氨酸等系列产品,是世界公认的绿色生化制品,因此,可以说全球80%以上的氨基酸市场是属于我们的,这就给我们提供了一个极好的发展空间。
土壤氨基糖测定方法
目的是计算微生物残体碳、真菌残体碳和细菌残体碳及其储量。土壤中氨基糖的测定研究,旨在探讨土壤微生物群落结构以及氨基糖与碳积累之间的相互关联。
血清各类氨基酸测定多少钱
它是肝脏内的一种转氨酶,在肝脏受到损害时会释放到血液中引起血清丙氨基酸转移酶上升,正常情况下没有
休息或喝酒也会引起它的升高
血清丙氨酸氨基转移酶在正常上线2倍以上(大于80),其他没有太大的临床意义,您这是肝脏的损伤.
要找原因的,建议您到消化内科就诊,查B超,查乙肝5项,查丙肝,确定引起血清丙氨酸氨基转移酶高的原因,如果乙肝,丙肝都阴,可以服用保肝药物治疗,如果乙肝或丙肝高,就需要抗病毒药物了
氨基酸水溶肥使用方法
1、使用氨基酸水溶肥一定要少量多施,一般每次每亩用量在3-6公斤。还要注意养分平衡水溶性肥料通常浇施,特别是在滴灌施肥条件下如果肥料配方不平衡,会影响作物生长,产生缺素症。
2、在选择氨基酸水溶肥的时候要注意,作物在某个时期所需的是哪种肥料和肥料的质量,要用科学的方法给作物施肥,也要注意水溶肥肥效时间,不要盲目的推测。
3、氨基酸水溶肥的施肥时间不应该间隔太长,水溶肥肥效时间大概为20天。同时,水溶肥在施肥时间上应该根据作物吸收养分时间长短来决定,不然就会造成水溶肥效果不佳。
4、氨基酸水溶肥不能直接用大水将肥料冲施至蔬菜瓜果等作物的根部,水中肥料养分必然会随水的冲击堆积至一处,造成水溶肥的养分分布不均,甚至是流失其他地方,使得作物吸收不全面,最终导致氨基酸水溶肥的效果不佳。
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